由HIV-1 TAT蛋白基本结构域和富含精氨酸的多肽介导的人过氧化氢酶转导到哺乳动物细胞。
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金丽莲，Bahn JH, Eum WS, Kwon HY, Jang SH, Han KH, Kang TC, Won MH, Kang JH, Cho SW, Park J, Choi SY
由HIV-1 TAT蛋白基本结构域和富含精氨酸的多肽介导的人过氧化氢酶转导到哺乳动物细胞。
自由基生物医学杂志，2001;31(11):1509-19。
- PubMed ID
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11728823 (PubMed视图]
- 摘要
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抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)被认为对活性氧(ROS)介导的各种疾病有有益的作用。虽然已经产生了多种修饰的重组抗氧化酶来抵御氧化应激，但由于缺乏向细胞内转导的能力，导致细胞内ROS的解毒能力有限。为了使过氧化氢酶在细胞外加入时能够解毒细胞内ROS，生成了细胞渗透性重组过氧化氢酶蛋白。克隆了人肝过氧化氢酶基因，并与编码HIV-1 Tat蛋白转导结构域的基因片段(RKKRRQRRR)和富含精氨酸的多肽(RRRRRRRRR)在细菌表达载体中融合，分别生成基因框内Tat- cat和9Arg-CAT融合蛋白。在外源培养基中加入表达纯化的融合蛋白后，可以以时间和剂量依赖的方式转导到哺乳动物细胞(HeLa和PC12细胞)中，并且转导的融合蛋白在60 h内具有酶活性和稳定性。当暴露于h (2)O(2)时，转染了tta - cat或9Arg-CAT融合蛋白的HeLa细胞的活力显著增加。当细胞被百草枯(一种细胞内抗氧化阴离子发生器)处理时，与转导的SOD结合，转导的过氧化氢酶也导致细胞活力的协同增加。然后，我们评估了过氧化氢酶融合蛋白转导到动物皮肤的能力。结果表明，通过免疫组化和特异性酶活性分析，Tat-CAT和9Arg-CAT融合蛋白在动物皮肤上喷洒后，能有效穿透表皮和真皮皮下层。这些结果表明，Tat-CAT和9Arg-CAT融合蛋白可用于与该抗氧化酶相关的各种疾病的蛋白质治疗。