高分辨率的晶体结构delta5-3-ketosteroid异构酶和中间模拟没有反应。
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Kim SW Cha党卫军,曹HS, Kim JS哈数控,曹MJ, Joo年代,Kim KK Choi肯塔基州,哦黑洞
高分辨率的晶体结构delta5-3-ketosteroid异构酶和中间模拟没有反应。
生物化学。1997年11月18日,36 (46):14030 - 6。
- PubMed ID
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9369474 (在PubMed]
- 文摘
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细菌Delta5-3-ketosteroid异构酶(KSI)催化立体定向异构化的类固醇基质以极快的速度,克服大pKa值催化残基之间的差距及其目标。KSI的晶体结构从假单胞菌与equilenin putida和酶的复杂,模拟反应的中间,就下定决心分辨率1.9和2.5,分别。Tyr14的结构表明,侧链和Asp99(新发现的催化残基)形成氢键直接与oxyanion完全无极的绑定抑制剂的活性部位的环境。没有找到水分子活性位点,以及大量的访问被一层非极性溶剂残留。Asp99周围是六个无极的残留物,因此,其pKa似乎上升高达9.5与早期的研究一致。没有发现交互之间的绑定抑制剂和残留101(苯丙氨酸在假单胞菌testosteroni和蛋氨酸p putida KSI)的建议做出显著贡献的速度增强基于突变分析。这个观察排除残留101作为一个潜在的催化残基,要求增强应该完全由Tyr14和Asp99解释道。Y14F和D99L突变酶的动力学分析表明,Tyr14贡献比Asp99更显著的增强。先前的研究和结构分析表明,低门槛的氢键Tyr14(> 7.1千卡每摩尔),以及一个中等强度的氢键Asp99(大约4千卡每摩尔),占11千卡每摩尔的所需的能量过渡态的稳定。