两种基本机制的证据包括酪氨酸- 265从219年精氨酸-丙氨酸消旋酶的突变体。
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太阳,托尼
两种基本机制的证据包括酪氨酸- 265从219年精氨酸-丙氨酸消旋酶的突变体。
生物化学,1999年3月30日,38 (13):4058 - 65。
- PubMed ID
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10194319 (在PubMed]
- 文摘
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带正电的残渣,R219被发现与磷酸吡哆醛的吡啶氮丙氨酸消旋酶的结构从芽孢杆菌stearothermophilus (Shaw et al .(1997)生物化学36岁,1329 - 1342]。三个基因定点突变体、R219K R219A, R219E,特征和相对于野生型酶(WT)调查R219在催化中的作用。R219K变异功能保守,保持大约25%的WT活动。R219A和R219E突变酶活性下降了大约100 - 1000倍,分别。这些结果说明带正电的残留在这个位置需要高效的催化作用。R219和Y265通过H166通过氢键相连。R219突变体具有相似的动力学同位素效应趋势:增加主要同位素效应(1.5倍),但没有改变溶剂同位素效应在L - - > D方向和增加溶剂同位素效应(1.5倍),但不变的主要同位素D - - > L方向的影响。这些结果支持两种基本涉及Y265和K39外消旋化机制。他们另外表明Y265选择性摄动通过H166 R219突变形成氢键网络。pH值资料显示一个大pKa从7.1 - -7.4 (WT和R219K)转移到9。 5-10.4 (R219A and R219E) for kcat/KM, and from 7.3 to 9.9-10.4 for kcat. The group responsible for this ionization is likely to be the phenolic hydroxyl of Y265, whose pKa is electrostatically perturbed in the WT by the H166-mediated interaction with R219. Accumulation of an absorbance band at 510 nm, indicative of a quinonoid intermediate, only in the D --> L direction with R219E provides additional evidence for a two-base mechanism involving Y265.