探测苏氨酸和丝氨酸残基的作用位点突变的天冬酰胺酶大肠杆菌二世。
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Derst C, hensel J,罗门哈斯KH
探测苏氨酸和丝氨酸残基的作用位点突变的天冬酰胺酶大肠杆菌二世。
蛋白质Eng。1992; 12月5 (8):785 - 9。
- PubMed ID
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1287659 (在PubMed]
- 文摘
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位点突变已被用于探测氨基酸残基提出由大肠杆菌二天冬酰胺酶催化的关键。在所有已知的天冬酰胺酶Thr12是守恒的。T12A突变体的催化常数对天门冬氨酸beta-hydroxamate减少野生型活动的0.04%,而其公里和稳定性对尿素变性持平。突变体酶病人表现出几乎正常活动但改变底物特异性。更换Thr119 Ala减少导致了90%的活动没有显著影响衬底绑定。突变体酶S122A显示正常催化功能但稳定受损尿素的解决方案。这些数据表明,羟基Thr12直接参与催化,可能有利与过渡态交互或中间。相比之下,Thr119和Ser122假定的目标站点的钝化剂DONV,在功能上是不那么重要了。