表达、纯化和鼠疫的重组蛋白酪氨酸磷酸酶的物理化学特性。
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张ZY,克莱门斯JC,舒伯特HL Stuckey是的,费舍尔MW,休谟DM, sap妈,我的迪克森
表达、纯化和鼠疫的重组蛋白酪氨酸磷酸酶的物理化学特性。
J生物化学杂志。1992年11月25日,267 (33):23759 - 66。
- PubMed ID
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1429715 (在PubMed]
- 文摘
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鼠疫的蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPase) Yop51 C235R点突变(Yop51 *),蛋白质缺乏前162个氨基酸的氨基末端(Yop51 * 162(δ)过表达在大肠杆菌和纯化同质性通过使用CM交联葡聚糖这件阳离子交换色谱g - 100交联葡聚糖凝胶过滤紧随其后。大于50毫克的齐次Yop51 *和Yop51 *δ162可以获得一个升细菌培养,而收益率只有5毫克的纯Yop51相同步骤。大,diffraction-quality晶体已经获得Yop51 * 162(δ)。尺寸排阻色谱法、沉降平衡和酶浓度依赖性实验建立了,就要PTPases存在和功能单体的解决方案。Yop51和Yop51 *显示相同的紫外线,CD,荧光光谱和有相同的动力学和结构稳定性特性。这些长篇鼠疫PTPases有31%的α螺旋,排放最多342海里,1200年营业额的s - 1在pH值为5.0,30摄氏度,和一个展开δG值6千卡每摩尔在25度C . Yop51 *δ162非常相似的动力学和全长分子的荧光特性,而其CD和紫外线光谱显示明显的差异由于消除162 NH2-terminal残留。的鼠疫PTPases PTPases迄今为止最活跃,及其动力学参数非常敏感,反应介质的离子强度。