大量增加一般稳定枯草杆菌蛋白酶症”通过增量的自由能变化展开。
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Pantoliano MW,甲沟炎,木摩根富林明,多德西南,Hardman KD, Rollence ML,布莱恩PN
大量增加一般稳定枯草杆菌蛋白酶症”通过增量的自由能变化展开。
生物化学。1989年9月5日,28(18):7205 - 13所示。
- PubMed ID
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2684274 (在PubMed]
- 文摘
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六个人氨基酸替换在单独的位置在枯草杆菌蛋白酶的三级结构症”(EC 3.4.21.14)被发现增加这种酶的稳定性,根据微分扫描量热法和热失活率下降。这些稳定的变化、N218S G169A、Y217K M50F, Q206C, N76D,被发现通过使用五种不同的调查方法:(1)随机诱变;(2)设计埋疏水侧组;(3)设计的静电相互作用在钙离子结合位点;(4)序列同源性的共识;和(5)意外的惊喜。单独,六个氨基酸替换增加δG之间展开的0.3和1.3千卡/摩尔在58.5度C的组合这六个人一起稳定变异成一个枯草杆菌蛋白酶症的分子被发现导致大约独立和增加添加剂的δG展开给净增加3.8千卡/摩尔(58.5摄氏度)。热力学稳定性也显示出与耐不可逆失活,包括高温(65度)或极端碱性(pH值12.0)。在这些变性条件下,组合变异的失活速率大约是慢300倍比野生型枯草杆菌蛋白酶症”。比较1.8分辨率晶体结构的突变体和野生型酶显示只有独立和局部结构变化在氨基酸的侧基替换。(抽象截断在250字)