如何变异glycine96丙氨酸授予草甘膦无视5-enolpyruvyl shikimate-3-phosphate合酶大肠杆菌。
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希利毫升Eschenburg年代,抓斗,Lushington GH,美泉宫E
如何变异glycine96丙氨酸授予草甘膦无视5-enolpyruvyl shikimate-3-phosphate合酶大肠杆菌。
足底。2002年11月,216 (1):129 - 35。Epub 2002年11月12日。
- PubMed ID
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12430021 (在PubMed]
- 文摘
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酶5-enolpyruvyl shikimate-3-phosphate (EPSP)合酶(EC 2.5.1.19)是至关重要的芳香族化合物的生物合成在植物和微生物除草剂草甘膦的唯一目标。第一个glyphosate-insensitive酶报告是一个Gly96Ala变异EPSP合酶的肺炎克雷伯菌。我们这单突变引入高度同源EPSP合酶大肠杆菌。突变酶对草甘膦对第一衬底的亲和力,shikimate-3-phosphate (S3P),但显示30倍低亲和力的第二衬底,磷酸烯醇丙酮酸(PEP)。使用x射线晶体学,我们解决Gly96Ala-EPSP合成酶的结构配位体与S3P 0.17纳米的分辨率。的晶体结构表明,额外的甲基Ala96突出到酶的活性部位。而酶之间的相互作用和S3P仍未受影响,草甘膦绑定的访问体积大大减少。利用晶体分子建模结果,我们证明PEP但不是草甘膦可以停靠在Gly96Ala-modified绑定网站。早些时候预测PEP绑定网站满足提出了PEP EPSP合成酶和交互模式证实了假设草甘膦和PEP目标相同的结合位点。