分析全球反应的蛋白质和肽指纹图谱由二维凝胶电泳分离的蛋白质。应用程序sulfate-starvation响应的大肠杆菌。
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Quadroni M, Staudenmann W,安德烈•柯特兹米,詹姆斯P
分析全球反应的蛋白质和肽指纹图谱由二维凝胶电泳分离的蛋白质。应用程序sulfate-starvation响应的大肠杆菌。
239欧元。1996 8月1;(3):773 - 81。
- PubMed ID
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8774726 (在PubMed]
- 文摘
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一组8蛋白(SSI, sulfate-starvation-induced蛋白质)是比较观察到二维电泳诱导大肠杆菌生长时使用硫酸化合物以外或半胱氨酸作为唯一硫源。这些蛋白质分离二维凝胶电泳后,用胰蛋白酶消化和群众产生的肽由质谱分析。群众肽作为蛋白指纹的列表是用于搜索数据库,允许四SSI的蛋白质(SSI2, 5、7、8)与高度的信心被识别。确定其他SSI蛋白质,获得尽可能多的蛋白质的序列信息,自动在线高效液相色谱MS / MS(分裂分析使用耦合质量扫描设备)进行数据收集。粗略的MS / MS谱被用作肽指纹搜索数据库。基因编码两个进一步的蛋白质(SSI 1和3)被确定在8.5的大肠杆菌的基因组区域。氨基端测序的结果确诊的蛋白质的蛋白质和肽指纹图谱相似,除了表明,SSI 6显示了50%的枯草芽孢杆菌orfM基因产物。SSI 4不是这些数据库中发现的方法。普遍使用的方法描述复杂的细胞反应的快速分析。女士数据积累大约需要5分钟/蛋白质蛋白质指纹和30分钟beplayapp肽指纹,需要大约100 fmol的材料。 N-terminal sequencing however, takes about 5 h/protein and approximately 1 pmol to obtain a 10 amino acid sequence for a search.