大肠杆菌胸腺苷酸合成酶与大肠杆菌胸腺苷酸合成酶mRNA特异性相互作用的表征
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voleller DM, Changchien LM, Maley GF, Maley F, Takechi T, Turner RE, Montfort WR, Allegra CJ, Chu E
大肠杆菌胸腺苷酸合成酶与大肠杆菌胸腺苷酸合成酶mRNA特异性相互作用的表征
核酸学报，1995,11;23(5):869-75。
- PubMed ID
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7708505 (PubMed视图］
- 摘要
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先前的研究表明，人类TS mRNA翻译受负性自调节机制控制。在这项研究中，RNA电泳凝胶迁移转移实验证实了大肠杆菌(E.coli) TS蛋白与其自身的E.coli TS mRNA之间的直接相互作用。在大肠杆菌TS mRNA蛋白编码区鉴定出两个顺式作用序列，一个位点对应于核苷酸207 ~ 460，另一个位点对应于核苷酸461 ~ 807。这些mRNA序列与TS结合的相对亲和力与大肠杆菌TS全长mRNA序列相似(IC50 = 1 nM)。鉴定出第三个结合位点，与核苷酸808-1015相对应，尽管其对TS的相对亲和力(IC50 = 5.1 nM)低于其他两个顺式作用元件。位于核苷酸结合区域的氨基酸发生突变的大肠杆菌TS蛋白保留了结合RNA的能力，而在核苷酸活性位点半胱氨酸(C146S)或叶酸结合区域的氨基酸发生突变的蛋白则无法结合TS mRNA。这些研究表明，大肠杆菌TS上由叶酸结合位点和/或关键半胱氨酸巯基定义的区域可能是重要的RNA结合域。进一步的证据表明，与TS的直接相互作用导致大肠杆菌TS mRNA翻译的体外抑制。