定点诱变phosphate-binding共识序列的大肠杆菌adenylosuccinate合成酶。
文章的细节
-
引用
复制到剪贴板 -
刘F,董Q,弗洛姆HJ
定点诱变phosphate-binding共识序列的大肠杆菌adenylosuccinate合成酶。
J生物化学杂志。1992年2月5日,267 (4):2388 - 92。
- PubMed ID
-
1733940 (在PubMed]
- 文摘
-
Adenylosuccinate合成酶来自不同来源的含有一个氨基端glycine-rich序列GDEGKGK,这是保守序列同源GXXXXGK发现在许多其他鸟嘌呤nucleotide-binding蛋白质或酶。确定这个序列的作用在大肠杆菌adenylosuccinate合成酶的结构和功能,进行定点诱变产生五个突变酶:G12V (Gly12——Val) G15V (Gly15——Val) G17V (Gly17——Val) K18R (Lys18——Arg)和I19T (Ile19——刺)。的动力学特性比较野生型和突变体酶酶显示序列对酶活性至关重要。更换Gly12、Gly15或Gly17 Val,或更换Lys18参数,导致显著降低kcat /公里的酶值。因为共识序列GXXXXGK (T / S)被发现在许多GTP-binding蛋白质,异亮氨酸在19日在大肠杆菌adenylosuccinate合成酶的位置更改为苏氨酸生产GDEGKGKT序列。这种突变,这更像共识序列,导致增加160倍的Km值基质三磷酸鸟苷;然而,没有巨大的变化对于其他两种基质,IMP和天冬氨酸。基于这些数据,我们建议氨基glycinerich序列在大肠杆菌adenylosuccinate合成酶扮演更重要的角色在酶催化底物绑定。此外,疏水性氨基酸残基如异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸,苏氨酸,而是可能发挥重要作用在三磷酸鸟苷结合adenosuccinate合成酶。这些发现表明,glycine-rich序列adenylosuccinate合成酶功能不同的相对于其他三磷酸鸟苷结合蛋白或酶。