催化反应的机制mandelate消旋酶。3所示。不对称催化反应H297N突变。
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Landro是的,Kallarakal,赎金SC Gerlt是的,Kozarich JW, Neidhart DJ,肯扬GL
催化反应的机制mandelate消旋酶。3所示。不对称催化反应H297N突变。
生物化学。1991年9月24日,30 (38):9274 - 81。
- PubMed ID
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1909893 (在PubMed]
- 文摘
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前两个文件(权力,v . M。古,c W。肯扬,g . L。Gerlt, j。& Kozarich j . w .(1991)生物化学(第一篇论文的三个问题);Neidhart d J。豪厄尔,p . L。Petsko, g。,权力,诉M。李,R。肯扬,g . L。& Gerlt j . a(1991)生物化学(第二篇论文的三个问题)]表明,活性部位的mandelate消旋酶(先生)包含两个不同的酸/碱催化剂将军:赖氨酸166,这抽象的质子(S) -mandelate,和他的297,抽象(R) -mandelate的质子。在本文中,我们报告的属性突变的先生,他在297年被定点诱变转化为天冬酰胺(H297N)。H297N的结构,解决了分子替换为2.2 a分辨率,显示没有构象的改变伴随替换。正如所料,H297N先生没有可检测活动。然而,H297N催化外消旋的立体定向消除溴离子p -(溴乙基)mandelate给p -(甲基)-benzoylformate速度45%的收益率等于测量对野生型酶; the unreacted p-(bromomethyl)mandelate is recovered as (R)-p-(hydroxymethyl)mandelate. At pD 7.5, H297N catalyzes the stereospecific exchange of the alpha-proton of (S)- but not (R)-mandelate with D2O solvent at a rate 3.3-fold less than that observed for incorporation of solvent deuterium into (S)-mandelate catalyzed by wild-type enzyme. The pD dependence of the rate of the exchange reaction catalyzed by H297N reveals a pKa of 6.4 in D2O, which is assigned to Lys 166.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)