守恒和nonconserved残留物的底物结合位点7,8-diaminopelargonic酸合酶的大肠杆菌对于催化至关重要。
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Sandmark J,艾略特AC, Famm K,施耐德G, Kirsch摩根富林明
守恒和nonconserved残留物的底物结合位点7,8-diaminopelargonic酸合酶的大肠杆菌对于催化至关重要。
生物化学。2004年2月10日,43(5):1213 - 22所示。
- PubMed ID
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14756557 (在PubMed]
- 文摘
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维生素B(6)端依赖酶7,8-diaminopelargonic酸(DAPA)合酶催化合成生物素的倒数第三个的一步,转让alpha-amino群S-adenosyl-l-methionine (SAM) 7-keto-8-aminopelargonic酸(KAPA)形成防卫事业厅。Y17F, Y144F, D147N突变活性位点独立了。k (max) / k (m)(应用)的值与防卫事业厅Y17F和Y144F突变体的半反应减少1300 - 2900倍,分别与WT酶。晶体分析这些突变体不显示活性部位的结构将发生重大变革。动能不足,加上enzyme-PLP /防卫事业厅米歇利斯复杂的结构模型,指出这两个的作用残留在采办局承认/ KAPA基质和催化作用。k (max) / k (m)为半反应(app)值与山姆WT酶相似,表明这两个酪氨酸残基是没有参与这半反应。突变的守恒Arg253独特影响山姆动力学,从而建立这个职位的山姆结合位点。在两个半反应D147N突变是催化地无所作为。这个突变体的结构表现出显著的活性部位的变化,表明这个残渣中扮演一个重要的结构性作用。的四个残留物检查,只有Tyr144和Arg253严格守恒的防卫事业厅合成酶的可用的氨基酸序列。 This enzyme thus provides an illustrative example that active site residues essential for catalysis are not necessarily conserved, i.e., that during evolution alternative solutions for efficient catalysis by the same enzyme arose. Decarboxylated SAM [S-adenosyl-(5')-3-methylthiopropylamine] reacts nearly as well as SAM and cannot be eliminated as a putative in vivo amino donor.