替换Arg214 p-hydroxybenzoate substrate-binding网站的羟化酶的荧光假单胞菌。
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效力过W,韦氏比重,Eschrich K, Eppink M,德角
替换Arg214 p-hydroxybenzoate substrate-binding网站的羟化酶的荧光假单胞菌。
。1992欧元12月1;210 (2):411 - 9。
- PubMed ID
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1459126 (在PubMed]
- 文摘
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从荧光假基因编码p-hydroxybenzoate羟化酶在大肠杆菌克隆为诱变研究提供DNA的蛋白质产品。质粒含有1.65 -kbp p .荧光染色体DNA的插入了和它的核苷酸序列确定。DNA-derived氨基酸序列完全一致的化学分离蛋白质的氨基酸序列决定的。酶表达强烈的影响下vector-encoded lac发起人和同质性的一个简单的三步进行净化过程。基质的关系绑定,基质效应的作用和羟基化使用定点诱变效率进行了研究。Arg214,与羧基离子对交互p-hydroxybenzoate一半,赖氨酸所取代,分别Gln和阿拉巴马州。NADPH自由酶的亲和力是不变,而芳香基质强烈的亲和力下降。对酶Arg214——>阿拉巴马州和Arg214——> Gln,衬底的效应作用。酶Arg214——>赖氨酸、绑定p-hydroxybenzoate高度刺激黄素的速度减少。在底物或底物类似物的存在,降低了酶Arg214 - - >赖氨酸未能稳定4 alpha-hydroperoxyflavin中间,高效的羟基化的必要条件。 Like the wild-type, enzyme Arg214-->Lys is susceptible to substrate inhibition. From spectral and kinetic results it is suggested that secondary binding of the substrate occurs at the re side of the flavin, where the nicotinamide moiety of NADPH is supposed to bind.