隔离和测序的基因编码三角洲5-3-ketosteroid异构酶的假单胞菌testosteroni:超表达的蛋白质。
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Kuliopulos, Shortle D, Talalay P
隔离和测序的基因编码三角洲5-3-ketosteroid异构酶的假单胞菌testosteroni:超表达的蛋白质。
《美国国家科学院刊S a . 1987年12月,84 (24):8893 - 7。
- PubMed ID
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3480517 (在PubMed]
- 文摘
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我们描述了克隆、测序和超表达类固醇的异构酶(3-oxosteroid三角洲5-delta 4-isomerase, EC 5.3.3.1)基因的假单胞菌testosteroni。基因组文库的p . testosteroni总DNA由部分EcoRI消化的结扎λgtWES向量是探测23-base寡核苷酸混合物(ATGAAC (T) ACC (A、T)在20 (C, A)呕吐(A) CAC (T) ATGAC]对应NH2-terminal类固醇异构酶的序列。积累来源于重组噬菌体包含一对5400 -基地-插入测序,发现含有预期375 -核苷酸开放阅读框在两端,在坐标系TGA终止密码子。DNA序列同意上述125 -氨基酸序列除了密码子22日,24日,33岁,38岁,所有的编码Asp而不是Asn,编码和密码子77,Glu而不是Gln。一双1370 -基地-片段插入举办的19岁的质粒向量和用于构建的大肠杆菌菌株JM 101中异构酶基因在异丙beta-D-thiogalactopyranoside的存在。胞质提取应变包含主要的可溶性蛋白质的迁移与类固醇delta-isomerase亚基聚丙烯酰胺凝胶电泳在十二烷基硫酸钠的存在。这些胞质提取物有10 - 50%的水晶异构酶的特定活动,根据方法的准备。重组酶在两个单斜结晶(平板)和六角形(双锥体)晶体形式,前面描述的酶p . testosteroni隔绝。水晶重组酶的动力学特性,包括特定的活动,为5-androstene-3公里,17-dione (340 microM),和Ki竞争性抑制剂19-nortestosterone (11.9 microM),同意与孤立的值报告酶。