的守恒cis-Pro39残渣中扮演着关键角色的正确定位甾酮异构酶的催化基础Asp38 Comamonas testosteroni。
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的守恒cis-Pro39残渣中扮演着关键角色的正确定位甾酮异构酶的催化基础Asp38 Comamonas testosteroni。
j . 2003 10月15日,375 (Pt 2): 297 - 305。
- PubMed ID
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12852789 (在PubMed]
- 文摘
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KSI(甾酮异构酶)Comamonas testosteroni homodimeric酶,催化作用与其共轭Delta4-isomers Delta5-3-ketosteroids的烯丙基的异构化反应速率相当于diffusion-controlled限制。基于KSI在一个高分辨率的结构分析,提出了守恒cis-Pro39残渣Asp38参与适当的定位,一个关键催化残渣、残自被发现不仅与Asp38结构有关,但也赋予结构刚度对当地Asp38组成的活性部位几何,Pro39, Val40, Gly41和Ser42灵活b-strands B1和B2之间循环。为了调查的结构性作用守恒cis-Pro39残留活性部位附近KSI, Pro39与丙氨酸或甘氨酸取代。活化自由能的P39A和P39G突变增加了10.5和16.7焦每摩尔(分别为2.5和4.0千卡每摩尔),而DG (U)水(展开的自由能变化没有尿素为25.00 + / - -0.02摄氏度)下降了31.0和35.6焦每摩尔(分别为7.4和8.5千卡每摩尔),与野生型相比酶。P39A突变体的晶体结构在复杂d-equilenin [d 1、3、5(10), 6日8-estrapentaen-3-ol-17-one],反应中间模拟,确定为2.3 (0.23 nm)的决议表明P39A突变明显中断d-equilenin和Asp38的正确方向,以及当地的活性部位几何Asp38附近,导致大量减少KSI的活性和稳定性。在绑定1-anilinonaphthalene-8-sulphonic酸,P39A和P39G突变体的荧光强度大大增加,以最大波长蓝移在绑定,表明突变可能改变KSI的疏水活性部位。综上所述,我们的研究结果表明,守恒cis-Pro39残渣中扮演着关键角色的正确定位关键催化基础Asp38和KSI活性部位的结构完整性。