起源不同的pH值活动概要文件在两个同源甾酮异构酶。
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Yun y,李TH,南GH,张成泽DS,胫骨,哦,黑洞,崔肯塔基州
起源不同的pH值活动概要文件在两个同源甾酮异构酶。
J生物化学杂志。2003年7月25日,278 (30):28229 - 36。2003年5月6日Epub。
- PubMed ID
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12734184 (在PubMed]
- 文摘
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两个同源Delta5-3-ketosteroid异构酶从Comamonas testosteroni (TI-WT)和假单胞菌putida B生物型(PI-WT)表现出不同的pH值活动概要。TI-WT失去活动pH值低于5.0由于守恒的质子化作用催化基础,Asp-38, PI-WT不。基于PI-WT的结构分析,关键催化基础,Asp-38,被发现与吲哚环形成氢键NH的- 116,这是同源TI-WT换成板式换热器- 116。调查的作用,116年,我们准备的F116W突变TI-WT (TI-F116W)和W116F突变的PI-WT相比(PI-W116F)和动力学参数的突变体在不同pH值。PI-W116F表现出显著降低催化活性TI-WT等酸性pH值,而TI-F116W保持在酸性催化活性PI-WT和kcat / Km值提高了2.5 - 4.7倍而TI-WT pH值3.8。TI-F116W明显的晶体结构表明,吲哚环NH的- 116能形成氢键的羧基氧Asp-38 PI-WT那样。目前的结果表明,PI-WT和TI-F116W低pH值的活动是由色氨酸,它不仅可以降低催化基础的pKa价值也增加底物亲和力。这是一个例子,可以采用进化策略性质的多样性在酶催化功能。我们的研究结果提供了洞察破译酶的分子进化,创造新型酶通过蛋白质工程。