二氢叶酸还原酶:顺序共振作业使用2 d和3 d NMR和二级结构的决心解决方案。
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卡尔博士Birdsall B, Frenkiel助教,鲍尔CJ, Jimenez-Barbero J, Polshakov VI,麦考密克我,罗伯茨GC,捐助J
二氢叶酸还原酶:顺序共振作业使用2 d和3 d NMR和二级结构的决心解决方案。
生物化学,1991年6月25日,30 (25):6330 - 41。
- PubMed ID
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1905571 (在PubMed]
- 文摘
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三维(3 d)杂环的核磁共振技术已经用于制造顺序1 h和15 n共振作业的大部分残留干酪乳杆菌二氢叶酸还原酶(DHFR),单体的蛋白质分子质量18300哒。均匀15 n-labeled样品蛋白的制备及其与甲氨蝶呤(MTX)研究复杂3 d 15 n / 1 h核Overhauser-heteronuclear多个量子相干(NOESY-HMQC) Hartmann-Hahn-heteronuclear多个量子相干(HOHAHA-HMQC), HMQC-NOESY-HMQC实验。这些实验克服了大多数的光谱重叠问题引起的化学位移简并在2 d光谱和允许1 h-1h在空间和通过债券连接性标识明确,导致共振作业。小说HMQC-NOESY-HMQC实验可以检测到一个交叉峰NH质子之间即使化学变化1 h退化只要酰胺15 n化学变化非简并。3 d实验,结合传统的2 d NOESY,舒适,和HOHAHA实验未标记的和选择性的氘DHFR提供骨干作业146 104 162残基侧链作业的残留的蛋白质。NOE-based实验的数据和识别的慢慢酰胺质子交换提供详细信息的二进制复杂蛋白质的二级结构与甲氨蝶呤。beplayapp顺序NHi-NHi + 1不与螺旋结构定义四个区域。两个地区,残留44-49和79 - 89年,对应于在一个氨基酸的螺旋线C和E DHFR.methotrexate的晶体结构。NADPH复杂[柏林et al。(1982)生物。化学。257年,13650 - 13662],而残留物形成的NMR-determined螺旋26 - 35周不等比螺旋一把短的n端B的晶体结构,跨度残留23-34。beplayapp同样,NMR-determined螺旋区域包括残留102 - 110有点抵消从晶体结构的螺旋F,包括残留97 - 107。 Regions of beta-sheet structure were characterized in the binary complex by strong alpha CHi-NHi+1 NOEs and by slowly exchanging amide protons. In addition, several long-range NOEs were identified linking together these stretches to form a beta-sheet. These elements align perfectly with corresponding elements in the crystal structure of the DHFR.methotrexate.NADPH complex, which contains an eight-stranded beta-sheet, indicating that the main body of the beta-sheet is preserved in the binary complex in solution.