角色的构象活性部位的灵活性glucosamine-6-phosphate脱氨酶的变构动力学。
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Bustos-Jaimes我,Sosa-Peinado Rudino-Pinera E, Horjales E, Calcagno毫升
角色的构象活性部位的灵活性glucosamine-6-phosphate脱氨酶的变构动力学。
J杂志。2002年5月24日,319 (1):183 - 9。
- PubMed ID
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12051945 (在PubMed]
- 文摘
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glucosamine-6-phosphate脱氨酶的活性部位从大肠杆菌(GlcN6P脱氨酶,EC 3.5.99.6)有一个复杂的盖子由两个反平行的beta-strands由helix-loop连接段(158 - 187)。这个主题包含Arg172,残渣参与绑定底物的活性部位,和三个残基的别构部位,Arg158, Lys160 Thr161。这种双重绑定角色的图案形成了盖子表明它在功能中扮演着重要角色活跃和变构网站之间的耦合。以前晶体工作表明,活性部位盖的温度系数非常大,当T变构酶的状态。这些系数R状态下降,从而表明这种主题改变其构象的灵活性因此变构的过渡。为了探索构象的灵活性之间可能的联系的盖子和脱氨酶的功能,我们构建基因定点突变Phe174-Ala。Phe174位于C-end盖子螺旋及其侧链的建立与剩余的疏水相互作用的酶。的晶体结构T Phe174-Ala脱氨酶,确定分辨率2.02,显示了部分没有密度162 - 181,这是部分的活性部位盖(PDB 1 jt9)。这种酶的突变体本质上是不活跃的没有变构的活化剂,N-acetylglucosamine-6-P虽然复苏的活动到野生型水平这个配体的存在。光谱和绑定的研究表明,缺乏运动是由于能力的活性部位结合配体时别构部位是空的。 These data indicate that the conformational flexibility of the active-site lid critically alters the binding properties of the active site, and that the occupation of the allosteric site restores the lid conformational flexibility to a functional state.