提高辛伐他汀在删除bioH大肠杆菌的生物转化。
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谢X,黄WW,唐Y
提高辛伐他汀在删除bioH大肠杆菌的生物转化。
金属底座Eng。2007年7月,9 (4):379 - 86。Epub 2007 6月5。
- PubMed ID
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17625941 (在PubMed]
- 文摘
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辛伐他汀是一个重要的胆固醇降低化合物,目前合成的天然产品通过多步化学合成洛伐他汀。我们之前报道的使用大肠杆菌菌株BL21 (DE3) / pAW31作为全细胞的宿主biocatalytic monacolin J酸转换成辛伐他汀酸。在发酵和生物转化,未知的大肠杆菌酶(s)水解膜渗透硫酯基质dimethylbutyryl-S-methyl mercaptopropionate (DMB-S-MMP)游离酸,显著降低全细胞生物转化的效率和下游纯化步骤。使用义塾k - 12 Singe-Gene淘汰赛集合,我们认为BioH唯一负责观察底物水解酶。净化和体外重组大肠杆菌BioH活动证实了它的功能。BioH催化的快速水解DMB-S-MMP kcat和公里260 + / -45年代的值(1)和229 + / -26 microM,分别。这与先前的报道是一致的,BioH可以作为对脂肪酸酯羧酸酯酶。YT2,δbioH突变BL21 (DE3),没有水解DMB-S-MMP期间长时间发酵,作为全细胞生物催化的另一个主机。YT2辛伐他汀酸合成的速度明显快于BL21 (DE3)和99%的15毫米辛伐他汀酸在不到12 h。此外,工程主机需要大大减少DMB-S-MMP添加完成完整的转换。 Finally, simvastatin acid synthesized using YT2 can be readily purified from fermentation broth and no additional steps to remove the hydrolyzed dimethylbutyryl-S-mercaptopropionic acid is required. Together, the proteomic and metabolic engineering approaches render the whole-cell biocatalytic process more robust and economically attractive.