表征Saccharopolyspora erythraea细胞色素p - 450基因和酶,包括6-deoxyerythronolide B羟化酶。
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安徒生摩根富林明,哈钦森CR
表征Saccharopolyspora erythraea细胞色素p - 450基因和酶,包括6-deoxyerythronolide B羟化酶。
J Bacteriol。1992年2月,174 (3):725 - 35。
- PubMed ID
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1732208 (在PubMed]
- 文摘
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先前的红霉素生物合成的研究表明,细胞色素p - 450单氧酶系统负责6-deoxyerythronolide B的羟基化erythronolide B的红霉素生物合成在Saccharopolyspora erythraea (a . Shafiee和c·r·哈钦森生化26:6204 1987年- 6210年)。以前纯化酶明显的同质性,发现催化转化率约为10(3)最低为1。最近,中断的p - 450编码序列(eryF) ermE的地区,美国erythraea红霉素耐药基因,产生了6-deoxyerythronolide B hydroxylation-deficient突变(j·m·韦伯j . o .梁s . j . Swanson k . B .空转和j·B·麦艾尔派恩科学252:114 - 116,1991)。在这项研究中我们净化催化地活跃细胞色素p - 450从美国erythraea分数,发现通过使用钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳,它由一个主要和次要的p - 450的物种。该基因编码的主要物种(orf405)从基因组DNA克隆,发现从eryF截然不同。orf405和eryF基因在大肠杆菌表达,和蛋白质的性质进行了比较。不等的表达EryF和Orf405都与抗血清发生反应准备对Shafiee描述的6-deoxyerythronolide B羟化酶和哈钦森(1987),和EryF多肽comigrated与小p - 450物种从美国erythraea钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳凝胶。在酶活性的比较,EryF羟化底物转化率的53个最低为1,而Orf405 6-deoxyerythronolide B模拟显示没有检测活动。这两种酶显示7-ethoxycoumarin O-dealkylation弱活动。我们得出结论,先前孤立6-deoxyerythronolide B羟化酶酶的混合物两个p - 450,只有轻微的形式显示6-deoxyerythronolide B羟化酶的活动。