结构研究的高亲和性结合位点色氨酸突变体的streptavidin-biotin复杂。
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齐库提Freitag年代,Le阮富仲我,Klumb洛杉矶,Stayton PS, Stenkamp再保险
结构研究的高亲和性结合位点色氨酸突变体的streptavidin-biotin复杂。
J杂志。1998年5月29日,279(1):211 - 21所示。
- PubMed ID
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9636711 (在PubMed]
- 文摘
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以前的热力学和计算研究指出重要的能量作用生成特殊的芳香联系人绑定streptavidin-biotin协会自由能。我们报告在这里单站点色氨酸的晶体特性突变体在调查这些芳香结构改变的后果联系人。四个色氨酸残基,Trp79、Trp92 Trp108 Trp120,扮演着重要的角色在疏水性绑定贡献,连同一个氢键网络和一个灵活的绑定循环产生紧配体绑定(Ka大约10 (13)m - 1)。ligand-free和biotin-bound突变体的晶体结构,W79F, W108F, W120F W120A,决议确定范围从1.9到2.3。9个数据集收集这四个不同的突变体,细化和结构模型进行热阻从0.15到0.20不等。主要的问题是如何解决这些突变影响链霉亲和素结合位点,特别是他们如何影响生物素的绑定模式复杂。的整体折叠链霉亲和素没有明显改变的色氨酸突变体。但有一个例外,只有轻微的偏差的结构观察。在一个水晶的游离W79F形式,有一个耦合的侧链的改变Phe29 Tyr43向突变的网站,尽管在不同的晶体形式不观察到这些变化。约束结构,生物素的方向在绑定的口袋里并没有显著改变变异复杂。 Compared with the wild-type streptavidin-biotin complex, there were no additional crystallographic water molecules observed for any of the mutants in the binding pocket. These structural studies thus suggest that the thermodynamic alterations can be attributed to the local alterations in binding residue composition, rather than a rearrangement of binding site architectures.