铜绿假单胞菌EnvCD同源物的克隆和序列分析:铁的调控和可能参与铁载体pyoverdine的分泌。
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普尔·K，海因里希斯·德，纳沙
铜绿假单胞菌EnvCD同源物的克隆和序列分析:铁的调控和可能参与铁载体pyoverdine的分泌。
Mol microbiology . 1993 11月10(3):529-44。
- PubMed ID
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7968531 (PubMed视图］
- 摘要
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铜绿假单胞菌菌株K437在90kDa铁吡啶受体的生产中存在缺陷，并且不能在非代谢铁螯合剂2,2'-联吡啶(0.25 mM)存在的缺铁培养基中生长。试图通过补充这一生长缺陷来克隆铁吡啶受体基因。在含联吡啶的培养基上获得了多个恢复K437生长的克隆，其中几个恢复了90 kDa受体的中等表达。从这些克隆中提取的5.5 kb xhoI-HindIII片段同样能够补充双吡啶生长缺陷，尽管它不能恢复90 kDa铁吡啶受体的表达。对5.5 kb片段的核苷酸测序显示了两个大的开放阅读框(orf)，命名为ORFA和ORFB，它们似乎形成了一个操纵子，分别能够编码41 kDa和112 kDa的产物。使用基于噬菌体t7的表达系统，从克隆的DNA中产生了42 kDa和约108 kDa的产物，证实了orf确实得到了表达。克隆的ORFAB操纵子在铜绿假单胞菌和大肠杆菌的铁限制条件下均可诱导。此外，表达ORFAB的突变体对pyoverdine和ferripyoverdine受体的产生具有本构性，这表明pyoverdine介导的铁转运系统的组分与ORFAB共同调节。ORFA和ORFB的预测产物与大肠杆菌EnvC和EnvD多肽有显著的同源性，据报道EnvC和EnvD多肽参与了隔膜的形成。此外，ORFB产物与被鉴定为Alcaligenes eutrophus膜相关质粒编码阳离子流出系统组成部分的CzcA多肽具有一定的同源性。 Using in vitro mutagenesis and gene replacement, ORFA- and ORFB-deficient mutants of K372, the parent strain of K437, were constructed. These mutants were unable to grow on iron-deficient minimal medium containing 0.25 mM dipyridyl although they expressed the ferripyoverdine receptor and were proficient in pyoverdine-mediated iron uptake. Despite the homology of the ORFA and ORFB products to EnvC and EnvD, respectively, the ORFA-ORFB-deficient mutants were not defective in septum formation.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)