的纯化和表征isoaspartyl二肽酶大肠杆菌。
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加里•JD克拉克
的纯化和表征isoaspartyl二肽酶大肠杆菌。
生物化学杂志。1995年2月24日,270 (8):4076 - 87。
- PubMed ID
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7876157 (在PubMed]
- 文摘
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我们已经确定了一个基因(iadA)在大肠杆菌编码41-kDa多肽,催化水解L-isoaspartyl乳沟,或L-beta-aspartyl,二肽。我们将演示至少3000倍从粗胞液纯化酶的同质性。伴的氨基酸序列获得从这个准备,我们设计了一个寡核苷酸,允许我们将基因映射到98 -染色体的最小区域和克隆,获得基因的DNA序列。推导氨基酸序列的检查并没有发现相似之处其他肽酶或蛋白酶,而显著的相似性被发现与几个dihydroorotases imidases,反映了相似结构的这些酶的底物。使用一个包含一个质粒的大肠杆菌菌株overexpressing这个基因,我们能够净化足够数量的二肽酶的底物特异性的特点。我们还研究了两个大肠杆菌菌株的表型isoaspartyl二肽酶基因被删除。我们插入一个氯霉素盒式的中断编码区iadA在两亲本菌株(MC1000)和导数应变(CL1010)缺乏pcm,基因编码的L-isoaspartyl甲基转移酶参与修复的异构化的蛋白质。我们发现iadA删除不会导致减少固定相或热休克的生存。删除应变分析isoaspartyl二肽酶活动原生低分子量的第二个活动透露,占大约31%的总活动MC1000父母压力。第二个活动可能占的存在可观测的缺席iadA突变细胞的表型。