细菌胞嘧啶脱氨酶突变体由分子工程显示改善5-fluorocytosine-mediated细胞杀死在体外和体内。
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Fuchita M, Ardiani,赵L, K,斯托达德提单,黑我
细菌胞嘧啶脱氨酶突变体由分子工程显示改善5-fluorocytosine-mediated细胞杀死在体外和体内。
癌症研究》2009年6月1日,69 (11):4791 - 9。doi: 10.1158 / 0008 - 5472. -能- 09 - 0615。
- PubMed ID
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19487291 (在PubMed]
- 文摘
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胞嘧啶脱氨酶结合使用5-fluorocytosine作为目标的enzyme-prodrug组合遗传癌症治疗。这种方法受限于低效基因传递和贫穷的前药转换活动。以前,我们报道个人衬底绑定口袋内的点突变细菌胞嘧啶脱氨酶(bCD)导致边际5-fluorocytosine改进使敏感细胞的能力(5 fc)。在这里,我们描述一个扩展随机诱变产生酶变异和选择实验,在前药敏化提供了显著的改善。三个突变体进行评估使用酶动力学分析然后化验三个癌症细胞系5 fc敏感,旁观者效应,和5 -氟尿嘧啶代谢产物的形成。所有变异显示18 -向5 fc 19-fold衬底偏好的变化,显著减少集成电路(50)值,改善了旁观者效应与野生型相比bCD。在异种移植肿瘤模型中,预防肿瘤生长的最佳酶突变体被证明更低剂量5 fc比观察到当肿瘤细胞表达野生型bCD。晶体构造分析表明改进的基础活动向5 fc,也有两种不同的突变策略收益密切相关但互斥的突变,每个结果显著改变酶的特异性。