可溶性细胞质表达,快速纯化和表征cyanovirin-N His-SUMO融合。
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陈高X, W,郭C, C钱,刘G、F通用电气,黄Y, Kitazato K,王Y,熊
可溶性细胞质表达,快速纯化和表征cyanovirin-N His-SUMO融合。
生物科技:Microbiol》。2010年1月,85 (4):1051 - 60。doi: 10.1007 / s00253 - 009 - 2078 - 5。Epub 2009年6月23日。
- PubMed ID
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19547966 (在PubMed]
- 文摘
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Cyanovirin-N (CVN)是一种有前景的候选抗病毒,极低的序列同源性与任何其他已知的蛋白质。生物功能的高效可溶性表达重组CVN (rCVN)仍是一个障碍由于产量不足,聚合和异常修改。在这里,我们描述了一种改进的方法来准备本地rCVN从大肠杆菌更有效率。融合基因组成的cvn和相扑(小ubiquitin-related修饰符)和hexahistidine标记构造根据密码子偏好的宿主细胞。这个小ubiquitin-related修饰符(相扑)融合CVN表达大肠杆菌细胞质的折叠和可溶性形式总可溶性蛋白的(> 30%),产生3到4毫克1 g的原生rCVN湿细胞纯度高达97.6%。Matrix-assisted激光解吸电离耦合飞行时间质谱法和反相高效液相色谱分析表明,纯化rCVN是一个完整的和均匀的蛋白分子量为11016 .68点哒。强有力的抗病毒活性rCVN对单纯疱疹病毒1型和人类免疫缺陷病毒1型/希望具有剂量依赖性的方式证实了摩尔浓度。因此,His-SUMO double-fused CVN为rCVN的可溶性表达提供了一个有效的方法在大肠杆菌细胞质,允许另一个系统开发的大规模生产抗病毒生物处理的候选人。