动能和x射线结构三个突变体的研究大肠杆菌碱性磷酸酶:见解没有亲核试剂Ser102的催化机理。
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Stec B, Hehir MJ,布伦南C,诺尔特米,Kantrowitz ER
动能和x射线结构三个突变体的研究大肠杆菌碱性磷酸酶:见解没有亲核试剂Ser102的催化机理。
J杂志。1998年4月3日,277 (3):647 - 62。
- PubMed ID
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9533886 (在PubMed]
- 文摘
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大肠杆菌碱性磷酸酶(EC 3.1.3.1)是一种非特异性磷酸单酯酶催化水解反应通过phosphoseryl中间生产无机磷酸盐和相应的酒精。我们调查的主要亲核试剂的性质,实现了由deprotonated Ser102,催化机理的变异这残留甘氨酸,丙氨酸和半胱氨酸。S102G的效率,S102A S102C酶和6 x 10(5)倍,10和10(4)(5)倍倍低于野生型酶,分别以kcat /公里比率来衡量,仍然大大高于non-catalyzed反应。为了研究结构的细节改变活性部位,酶是结晶和结构决定的。相对应的酶固定在一个新的晶体形式的空间群P6322。每个结构都有磷酸在每一个活性部位和显示了野生小偏离模型。S102G和S102A酶、磷酸野生型酶占有相同的地位,而在S102C酶2.5流离失所。这个动力学和结构研究表明一个解释的不同突变酶的催化效率和提供了一种方法来研究的性质和强度不同的亲核试剂在相同的环境中。分析这些结果提供了洞察其他类磷酸酶的机制不利用丝氨酸亲核试剂。