戏剧性的差异UDP-galactose的绑定和UDP-glucose UDP-galactose 4-epimerase从大肠杆菌。
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Thoden JB,霍尔顿嗯
戏剧性的差异UDP-galactose的绑定和UDP-glucose UDP-galactose 4-epimerase从大肠杆菌。
生物化学。1998年8月18日,37 (33):11469 - 77。
- PubMed ID
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9708982 (在PubMed]
- 文摘
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UDP-galactose 4-epimerase催化UDP-galactose互变现象和UDP-glucose在正常半乳糖代谢。在最近几年的酶大肠杆菌已被广泛研究生化和x射线晶体技术。的关键特性之一在酶的催化机理涉及4的假定的旋转-ketopyranose中间区域内活动网站。的绑定方式UDP-glucose差向异构酶是很好理解的基础上,以前的高分辨率x射线晶体从这个实验室调查与酶/ NADH / UDP-glucose流产复杂。尝试准备酶/ NADH / UDP-galactose流产复杂总是失败,然而,在UDP-glucose而不是观察UDP-galactose绑定在活性部位。为了准备一个流产与UDP-galactose复杂,一个基因定点突变蛋白建于149年在Ser 124和酪氨酸,在催化扮演关键角色,分别代替丙氨酸和苯丙氨酸残基。用这双突变体可以结晶和解决减少差向异构酶的三维结构的存在UDP-glucose或UDP-galactose高分辨率。这项研究是第一次直接观察UDP-galactose绑定差向异构酶和提供强大支撑结构的催化机理有自由旋转4的-ketopyranose中间酶的活性部位间隙内。