克隆和过度的乳酸菌helveticus D-lactate脱氢酶基因在大肠杆菌。
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Kochhar年代,加热H, Chuard N,泰勒PG,阿特金森T,尼科尔斯DJ Scawen医学博士
克隆和过度的乳酸菌helveticus D-lactate脱氢酶基因在大肠杆菌。
欧元。1992年9月15日,208 (3):799 - 805。
- PubMed ID
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1396685 (在PubMed]
- 文摘
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从乳酸菌helveticus NAD(+)端依赖D-lactate脱氢酶纯化明显的同质性,和第一个36个氨基酸残基的序列确定。使用正向和反向寡核苷酸引物,基于n端序列和氨基酸残基220 - 215乳酸菌发酵剂酶[Kochhar,保加利亚的年代。,p·E·亨泽尔。Leong-Morgenthaler p &加热,h(1992)生物。化学。267年,8499 - 8513],0.6 -kbp DNA片段从l .放大helveticus基因组DNA聚合酶链反应。这个放大DNA片段作为探针识别两个包含D-lactate脱氢酶基因的重组克隆。两个质粒中D-lactate脱氢酶(大于60%的总可溶性细胞蛋白质)和稳定在大肠杆菌,而质粒携带l .发酵剂和保加利亚乳杆菌的基因。整个核苷酸序列的l . helveticus D-lactate脱氢酶基因决定。推导的氨基酸序列表示由336个氨基酸残基组成的多肽,显示重要的氨基酸序列相似性最近确认的家庭D-2-hydroxy-acid脱氢酶(Kochhar, S。,p·E·亨泽尔。Leong-Morgenthaler p &加热,h .学生物化学(1992)。Biophys。 Res. Commun. 184, 60-66]. The physicochemical and catalytic properties of recombinant D-lactate dehydrogenase were identical to those of the wild-type enzyme, e.g. alpha 2 dimeric subunit structure, isoelectric pH, Km and Kcat for pyruvate and other 2-oxo-acid substrates. The kinetic profiles of 2-oxo-acid substrates showed some marked differences from that of L-lactate dehydrogenase, suggesting different mechanisms for substrate binding and specificity.