multigeneration分析细胞色素b(562)氧化还原变体:进化策略调节氧化还原电势透露使用库的方法。
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弹簧SL,低音,鲍曼G, Nodelman我shutt CE、萨默森当GL
multigeneration分析细胞色素b(562)氧化还原变体:进化策略调节氧化还原电势透露使用库的方法。
生物化学。2002年4月2;41 (13):4321 - 8。
- PubMed ID
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11914078 (在PubMed]
- 文摘
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细胞色素的氧化还原电位设置在新陈代谢和能量输出可能也是一个关键因素的氧化还原反应进行的速度。血红素蛋白,细胞色素b(562),用于研究氧化还原电势的体外进化变异的图书馆内含有相同的结构原型,四螺旋包。多点变异细胞色素b的活性部位(562)介绍了。库包含随机突变的变体的R98 R106成立,和氧化还原电位测量这个库的统计抽样。这个过程进行的低收入和高潜力的变异之前研究F61X / F65X,第一代图书馆(弹簧,s . L。低音,s E。萨默森当,g . l .(2000)生物化学39 6075]。第二代图书馆报道有一系列的氧化还原电位大于40% (160 mV)的已知的访问潜在的细胞色素中相同的轴向配体(但不同的折叠)和超过范围表现出系统的细胞色素c的家庭内部保持相同的轴向结扎和褶皱。库进行的统计分析表明,氧化还原电位的WT cyt b(562)发现的高潜力的极值分布,表明这种蛋白质显然进化到不同稳定减少蛋白质。的晶体结构2.7 F61I / F65Y / R106L(第二代的低电位变体库)是解决,与野生型相比结构和2.2 A分辨率结构F61I / F65Y变体(第一代的低电位变体库)。结构表明,charge-dipole影响负责向氧化氧化还原平衡状态转移F61I / F65Y和F61I / F65Y R106L变体。 Specifically, a new protein dipole is introduced into the heme microenvironment as a result of the F65Y mutation, two new internal water molecules (one in hydrogen-bonding distance of Y65) are found, and in the case of F61I/F65Y/R106L (DeltaE(m) = 158 mV vs NHE), increased solvent exposure of the heme as a result of the R106L substitution is identified.