使用定点诱变提高epitope-shielding共价改性效果与聚乙二醇的蛋白质。
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Chaffee Hershfield女士,年代,Koro-Johnson L,玛丽,史密斯AA,短SA
使用定点诱变提高epitope-shielding共价改性效果与聚乙二醇的蛋白质。
《美国国家科学院刊S a . 1991 8月15日,88 (16):7185 - 9。
- PubMed ID
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1714590 (在PubMed]
- 文摘
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修改共价连接的聚乙二醇(PEG)可以减少蛋白的免疫原性和延长循环寿命,但这种方法的实用程序对于任何蛋白质受到挂钩连接站点的数量和分布(例如,epsilon-amino赖氨酸残基组)。我们已经开发出一种策略引入额外的网站挂钩附件用定点诱变选择性取代精氨酸和赖氨酸基码和测试它与嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)大肠杆菌,极其稳定但免疫原性酶,可能用于治疗PNP型的遗传缺陷。RK3三突变体,拥有三个参数——赖氨酸替换了增加赖氨酸/ PNP型亚基的数量从14到17岁,提供额外的18个潜在挂钩附件网站每hexameric酶分子。野生型和RK3酶催化活性相似,抗原性和免疫原性。挂钩后修改,保留酶催化活性,酶在小鼠体内的血浆半衰期从大约4小时增加到4天,和绑定两个酶的抗血清对每个修改的酶明显减弱。然而,抗体对野生型PEG-PNP没有绑定PEG-RK3酶。PEG-RK3 PNP型免疫原性也显著低于野生型PEG-PNP。加速抗体介入清除PEG-PNP发生在治疗12 2鼠PEG-RK3 PNP型,相比之下,10的16小鼠接受修改后的野生型酶。这结合使用定向诱变和挂钩修改旨在允许的最大选择蛋白质,包括产品的遗传和化学”工程、“用于治疗遗传和后天失调。