大肠杆菌甲硫氨酸氨肽酶:影响晶体分析的本地人,突变,抑制酶的催化机制。
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鲁泽WT,奥维尔,马登DT, Lim年代,丰富DH,马修斯BW
大肠杆菌甲硫氨酸氨肽酶:影响晶体分析的本地人,突变,抑制酶的催化机制。
生物化学,1999年6月15日,38 (24):7678 - 88。
- PubMed ID
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10387007 (在PubMed]
- 文摘
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通过提高大肠杆菌的表达和纯化蛋氨酸氨基肽酶(eMetAP)和使用稍微不同的结晶条件下,母公司的分辨率结构扩展从2.4到1.9一项决议。这允许可视化协调几何和溶剂结构的活性部位双核的金属中心。一个溶剂分子(可能mu-hydroxide)桥梁的三方晶系的双锥体(Co1)和八面体(Co2)钴离子。第二个溶剂(可能是一个氢氧根离子)是晚期绑定到二氧化碳。单价阳离子结合位点也确定了约13远离金属中心之间的一个接口的两个子域蛋白质。beplayapp第一substrate-like抑制剂的结构(3 r)氨基- (2 s) -hydroxyheptanoyl-L-Ala-L-Leu-L-Val-L-Phe-OMe绑定到甲硫氨酸氨肽酶,也已确定。这个抑制剂坐标金属中心通过四个交互如下:(i)结扎的氨基端(3 r)氮气,二氧化碳,(ii, iii)桥接(2 s)羟基组的协调,及(iv)终端结扎Co1的酮氧pseudo-peptide联系。抑制剂具有约束力的发生与两个溶剂配体的位移和协调Co1范围的扩张。除了四配位基的,bis-chelate金属协调,底物类似物形成氢键His79和His178,两个守恒metap残留在活性部位。评估其重要性在催化His79和His178丙氨酸所取代。 Both substitutions, but especially that of His79, reduce activity. The structure of the His79Ala apoenzyme and the comparison of its electronic absorption spectra with other variants suggest that the loss in activity is not due to a conformational change or a defective metal center. Two different reaction mechanisms are proposed and are compared to those of related enzymes. These results also suggest that inhibitors analogous to that reported here may be useful in preventing angiogenesis in cancer and in the treatment of microbial and fungal infections.