大肠杆菌的转录激活环腺苷酸受体蛋白:区域内激活因素3。
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巴斯比SJ Rhodius VA
大肠杆菌的转录激活环腺苷酸受体蛋白:区域内激活因素3。
2000 J杂志。299年6月2;(2):295 - 310。
- PubMed ID
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10860739 (在PubMed]
- 文摘
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在二类CRP-dependent推动者,大肠杆菌环腺苷酸受体蛋白(CRP)与RNA聚合酶激活转录通过多个交互(RNAP)。两个离散表面c反应蛋白,称为激活区域1 (AR1)和激活区域2 (AR2)与c端和n端结构域相互作用,分别RNAPα亚基的。激活区域3 (AR3)是第三个独立的c反应蛋白表面,它被认为与一个目标c端地区的RNAP西格玛(70)亚基。我们使用一个c反应蛋白突变体功能主要通过AR3 CRP HL159 KE101 KN52,作为一种工具来识别残留在AR3重要的激活。这是通过筛选随机突变库的基因编码CRP HL159 KE101 KN52积极控制在二类CRP-dependent启动子突变体,并通过执行丙氨酸扫描诱变。使用体内记者化验和体外转录化验,我们测量的影响关键替换在AR3转录激活都CRP HL159 KE101 KN52和野生型c反应蛋白。我们表明,集群带负电surface-exposed残留在职位53岁,54岁,55 - 58二类优化需要激活,但我不是在一个类,CRP-dependent启动子。我们得出这样的结论:这些残留物AR3二类c反应蛋白形成一个activatory行列式的转录激活。流产开始分析被用来表明该activatory行列式加速的异构化率从封闭到开放的复杂二类CRP-dependent启动子。AR3 CRP还包含一个抑制因素:52 c反应蛋白的赖氨酸残基的立场是抑制最大水平II级启动子的转录激活。 We show that the negative effects of K52 are not simply due to "masking" of the negatively charged residues at positions 53, 54, 55 and 58. Our results suggest that, during activation by wild-type CRP, the activatory and inhibitory determinants of AR3 balance each other. Thus, activation is predominantly determined by AR1 and AR2.