之间的相互作用激活区域3的大肠杆菌环腺苷酸受体蛋白和RNA聚合酶的地区4σ(70)亚基:抑制遗传学中的应用。
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巴斯比SJ Rhodius VA
之间的相互作用激活区域3的大肠杆菌环腺苷酸受体蛋白和RNA聚合酶的地区4σ(70)亚基:抑制遗传学中的应用。
J杂志。2000年6月2,299 (2):311 - 24。
- PubMed ID
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10860740 (在PubMed]
- 文摘
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大肠杆菌环腺苷酸受体蛋白,c反应蛋白,诱导转录二类CRP-dependent发起人通过三种不同activatory接触不同表面的整体RNA聚合酶。CRP接触表面之一,被称为激活区域3 (AR3),在下游功能单元的c反应蛋白二聚体和预计与地区4 RNAP西格玛(70)的亚基。我们先前已经表明,突变CRP导数通过AR3主要激活转录,CRP HL159 KE101 KN52,需要带正电的残留K593, K597和R599σ(70)激活。在这里,我们使用积极的控制替换,EK58,扰乱AR3-dependent激活CRP HL159 KE101 KN52。然后我们筛选随机突变库和丙氨酸扫描σ图书馆(70)为候选人,恢复激活CRP HL159 KE101 KN52 EK58。我们发现变化R596和R599σ(70)可以恢复激活CRP HL159 KE101 KN52 EK58。这表明R596和R599σ的侧链(70)与CRP K58发生冲突。最大激活的CRP HL159 KE101 KN52 EK58替换实现RE596或RD596σ(70)。我们建议有特定charge-charge E596之间的相互作用或D596σ(70)和K58 AR3。因此,没有观察到激活增加的另一个积极控制替换,EG58 (CRP HL159 KE101 KN52 EG58)。 Similarly, both sigma(70) RE596 and sigma(70) RD596 can restore activation by CRP EK58 but not CRP EG58, and they both decrease activation by wild-type CRP. We suggest that E596 and D596 in sigma(70) can positively interact with K58 in AR3, thereby enhancing activation, but negatively interact with E58, thereby decreasing activation. The substitution, KA52 in AR3 increases Class II CRP-dependent activation by removing an inhibitory lysine residue. However, this increase is not observed in the presence of either sigma(70) RE596 or sigma(70) RD596. We conclude that the inhibitory side-chain, K52 in AR3, clashes with R596 in sigma(70). Finally, we show that the sigma(70) RE596 and RD596 substitutions affect CRP-dependent activation from Class II, but not Class I, promoters.