探索glucosamine-1-phosphate乙酰转移酶活动的半胱氨酸残基的作用的双官能GlmU从大肠杆菌蛋白质:突变酶的定点诱变和表征。
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旁派F,范Heijenoort J, Mengin-Lecreulx D
探索glucosamine-1-phosphate乙酰转移酶活动的半胱氨酸残基的作用的双官能GlmU从大肠杆菌蛋白质:突变酶的定点诱变和表征。
J Bacteriol。1998年9月,180 (18):4799 - 803。
- PubMed ID
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9733680 (在PubMed]
- 文摘
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glucosamine-1-phosphate乙酰转移酶活动但不是uridyltransferase活动失去了双官能GlmU酶的大肠杆菌GlmU存储时没有beta-mercaptoethanol或孵化thiol-specific试剂。失活的酶保护其底物的存在乙酰辅酶A(乙酰辅酶A),表明存在一个不可或缺的半胱氨酸残基或乙酰转移酶的活性部位附近的域。确定角色的半胱氨酸酶的结构和功能,定点诱变进行改变的四个半胱氨酸丙氨酸,和质粒构建histidine-tagged高层生产过剩,一步纯化的蛋白质。而双功能酶的动力学参数出现C296A和C385A突变的影响,1350 - 8番乙酰转移酶活动的减少导致C307A C324A突变,分别。乙酰辅酶a的Km值和GlcN-1-P突变的蛋白质没有修改,建议没有半胱氨酸参与衬底绑定。野生型和突变体的uridyltransferase活动GlmU蛋白质是相同的。从这些研究中,两个半胱氨酸Cys307对乙酰转移酶和Cys324出现重要活动和似乎是位于或接近活性部位。