体外折叠大肠杆菌的外膜磷脂酶A。
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默克德克N, K, Tommassen J, Verheij嗯
体外折叠大肠杆菌的外膜磷脂酶A。
8月15日。1995欧元;232 (1):214 - 9。
- PubMed ID
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7556153 (在PubMed]
- 文摘
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重组外膜磷脂酶(OMPLA)大肠杆菌的表达没有信号序列的T7φ10启动子。结果克隆策略的蛋白质有六个氨基酸残基的氨基端延伸。包涵体蛋白细胞溶质的积累。条件建立了有效的折叠OMPLA体外的Triton x - 100。体外折叠后,蛋白质折叠和展开形式的混合物。离子交换色谱法用于OMPLA的净化和分离的正确折叠,enzymically从展开活跃的酶活性的蛋白质。最后蛋白质制备是纯粹和完全heat-modifiable基于SDS /页面。重组酶的特定活动的71 U /毫克,这类似于野生型酶的价值,从膜纯化。活性酶的最终收益是35毫克蛋白/ l文化A600的6。圆二色性光谱揭示了高含量的β链,在良好的协议与预测beta-barrel这个外膜蛋白的结构。