克隆,核苷酸序列、过度和失活的大肠杆菌2-keto-4-hydroxyglutarate醛缩酶基因。
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帕蒂尔房车,德克EE
克隆,核苷酸序列、过度和失活的大肠杆菌2-keto-4-hydroxyglutarate醛缩酶基因。
J Bacteriol。1992年1月,174 (1):102 - 7。
- PubMed ID
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1339418 (在PubMed]
- 文摘
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先前确定的完整的氨基酸序列2-keto-4-hydroxyglutarate醛缩酶大肠杆菌(c . j . Vlahos和e·e·德克尔生物。化学263:11683 - 11691,1988),我们加大了对这种酶的编码基因的聚合酶链反应合成退化deoxyoligonucleotide底漆使用。放大DNA测序subcloning聚合酶链反应产品到噬菌体M13;基因的核苷酸序列中被发现与基因的氨基酸序列完全协议产品。超表达的基因是通过克隆到pKK223.3表达载体,是tac启动子的控制下,然后利用合成质粒,pDP6,将大肠杆菌F 'IQ DH5α。当这株生长在beta-D-thiogalactopyranoside异丙酯的存在,醛缩酶提取特定活动原油日产量是80倍高于野生型细胞和酶构成了大约30%的细胞总蛋白。所有属性的纯化,克隆的基因产品,包括与野生型酶抗体引起,大是相同的与先前孤立的醛缩酶和特征。这个基因的大肠杆菌灭活是准备第一次的插入卡那霉素耐药基因盒的醛缩酶染色体基因。