从大肠杆菌的活性位点残基2-keto-4-hydroxyglutarate醛缩酶。Bromopyruvate失活和标签的谷氨酸45。
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从大肠杆菌的活性位点残基2-keto-4-hydroxyglutarate醛缩酶。Bromopyruvate失活和标签的谷氨酸45。
J生物化学杂志。1990年11月25日,265 (33):20384 - 9。
- PubMed ID
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1978721 (在PubMed]
- 文摘
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治疗的纯2-keto-4-hydroxyglutarate醛缩酶的大肠杆菌,“lysine-type,席夫碱酶机制,与底物模拟bromopyruvate结果在时间和浓度的酶活性损失。而基质丙酮酸和2-keto-4-hydroxyglutarate提供超过90%的保护由bromopyruvate失活,没有保护作用被认为与羟乙醛,乙醛酸的模拟。失活研究[14 c] bromopyruvate 14显示1.1摩尔的合并c-labeled化合物/酶亚基;隔离的放射性肽和氨基酸序列的测定表明,放射性与谷氨酸45。孵化酶的过剩[14 c] bromopyruvate与胍变性紧随其后。HCl允许掺入碳14的半胱氨酸159年和180年。而丙酮酸的存在保护Glu-45酯化,它不会阻止这两个半胱氨酸残基的烷基化。结果表明,大肠杆菌的Glu-45 2-keto-4-hydroxyglutarate醛缩酶催化活性是至关重要的,最有可能充当所需的两性质子供体/受体作为一个参与者在整个反应的催化机制。