表征及晶体结构大肠杆菌KDPGal醛缩酶。
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沃尔特斯MJ, Srikannathasan V,麦克尤恩AR,奈史密斯JH, Fierke CA, Toone EJ
表征及晶体结构大肠杆菌KDPGal醛缩酶。
Bioorg医疗化学。2008年1月15日,16 (2):710 - 20。Epub 2007年10月18日。
- PubMed ID
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17981470 (在PubMed]
- 文摘
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2-Keto-3-deoxy-6-phosphogluconate (KDPG)和2-keto-3-deoxy-6-phosphogalactonate (KDPGal)醛缩酶催化相同反应不同的底物特异性的配置只在一个异构中心。然而,显示小的蛋白质的氨基酸序列同源性的水平。这里我们研究这些酶的底物选择性的决定因素。的大肠杆菌KDPGal醛缩酶基因克隆到T7表达载体,在大肠杆菌中,天然底物的催化retro-aldol乳沟,KDPGal,与k值(cat) / k (M)和k (cat) 1.9 x10(4)(1)(1)和4 s(1),分别。有效的合成方向,KDPGal醛缩酶催化的醇醛使用有限数量的醛基质,包括d-glyceraldehyde-3-phosphate(自然基质),d -甘油醛、乙醇醛,2-pyridinecarboxaldehyde。规模制备反应KDPGal 2-pyridinecarboxaldehyde和丙酮酸催化的醛缩酶产生的醇醛加合物ee > 99.7%, R立体化学的一个结果的补充,观察使用相关KDPG醛缩酶。本机晶体结构解决了2.4的分辨率和显示相同的(α/β)(8)的拓扑结构,如KDPG醛缩酶。我们也决定2.1席夫碱的结构复杂的酶及其底物之间。该模型预测,一个氨基酸的变化,在KDPG T161醛缩酶在KDPGal V154醛缩酶,扮演重要的角色在决定酶催化的立体化学过程和预测被定点诱变研究证实。然而,额外的酶序列的变化需要准备一个酶催化效率高和立体化学改变。