利用荧光微球研究核受体的多重分子相互作用。
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Iannone MA, Consler TG, Pearce KH, Stimmel JB, Parks DJ, Gray JG
利用荧光微球研究核受体的多重分子相互作用。
细胞检测。2001年8月1日;44(4):326-37。
- PubMed ID
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11500849 (PubMed视图］
- 摘要
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背景:我们描述了一种新的基于微球的系统来识别和描述核受体与代表共激活蛋白LXXLL结合区域的多肽的多重相互作用。方法:在该系统中，具有独特的红色和橙色荧光谱的个体微球种群耦合到特定的共激活肽。辅激活剂肽偶联微球群体与已偶联到绿色荧光色素的核受体结合并孵育。流式细胞术分析微球同时解码每个群体，并通过获取绿色荧光检测受体与各自辅激活肽的结合。结果:我们利用该系统测定了人雌激素受体β配体结合结构域(ERbeta LBD)和人过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体结合结构域(PPARgamma LBD)与一组34个辅激活肽的结合亲和力。ERbeta LBD与含有类固醇受体辅激活剂-1的第二个LXXLL基序的辅激活剂肽序列(SRC-1(2)(676-700)的结合被证明是特异性和饱和的。对受体与一组多重共激活肽结合的分析表明，PPARgamma LBD与cAMP反应元件结合蛋白(CBP)多肽和相关P300多肽结合具有高亲和力，而ERbeta LBD与这些多肽结合很少。使用基于微球的实验，我们证明了在激动剂(雌二醇或GW1929)存在时，辅激活肽的ERbeta LBD和PPARgamma LBD结合亲和力增加，而在拮抗剂(雷洛昔芬或他莫昔芬)存在时，ERbeta LBD结合降低。结论:这种独特的基于微球的系统是一种敏感而有效的方法，可以在单个检测量中同时评估多种受体-辅激活剂的相互作用。此外，该系统为研究核受体结合的小分子调控提供了强有力的方法。