氯化氨甲酰胆碱与乙酰胆碱酯酶的反应分析使用thioflavin T作为耦合荧光记者。

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Rosenberry TL, Sonoda路,Dekat SE,库萨克B,约翰逊杰

氯化氨甲酰胆碱与乙酰胆碱酯酶的反应分析使用thioflavin T作为耦合荧光记者。

生物化学。2008年12月9日,47 (49):13056 - 63。doi: 10.1021 / bi8015197。

PubMed ID

19006330 (在PubMed

]

文摘

乙酰胆碱酯酶(疼痛)包含一个狭窄的活性部位深峡谷和配体的两个网站绑定,酰化站点(或网站)底部的峡谷和外围网站(或p区)附近的峡谷入口。p区对催化效率的瞬变约束力的基质上的酰化网站,一个短暂的acylated酶中间产生。氨基甲酸盐是非常贫穷的基质,就像其他疼痛基质,形成一个初始es复杂与自由疼痛acylated酶(E)和继续一个中间(EC),然后水解。然而,EC足够缓慢的水解催化的酰化和脱酰作用步骤解决途径。在这里,我们专注于碳酰胆碱的反应(carbamoylcholine)与疼痛。这个反应的动力学和热力学的特殊利益,因为碳酰胆碱是一种生理基质乙酰胆碱等排的模拟。我们表明,反应可以作为荧光记者监控thioflavin T组。thioflavin T是强烈的荧光增强,当它结合p区疼痛,这荧光部分淬火时第二配体结合形成三元复杂的网站。荧光反应的分析配置文件是具有挑战性的,因为四个热力学参数和两个荧光系数拟合相结合的数据为E和EC。各自的离解平衡常数均获得6 - 26毫米卡巴可绑定的E - P-sites和2和32毫米卡巴可绑定的EC - P-sites。 These constants for the binding of carbachol to the P-site are about an order of magnitude larger (i.e., indicating lower affinity) than previous estimates for the binding of acetylthiocholine to the P-site.

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药物

Carbamoylcholine

药物酶

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