超表达、净化、光亲和标记3 h-analogue诺氟沙星,GyrA和GyrB DNA促旋酶的亚基。
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Hombrouck C, Capmau ML,莫罗N
超表达、净化、光亲和标记3 h-analogue诺氟沙星,GyrA和GyrB DNA促旋酶的亚基。
细胞杂志(Noisy-le-grand)。1999年5月,45 (3):347 - 52。
- PubMed ID
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10386791 (在PubMed]
- 文摘
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尽管DNA促旋酶和喹诺酮类的很多工作多年,我们的知识分子基础的quinolone-gyrase行动仍然是不完整的。我们设计了一个光亲和标记试剂喹诺酮的目标,并合成了一种诺氟沙星与叠氮化函数模拟,在紫外光照射下变得共价链接到其目标。为此,需要大量纯化促旋酶。子单元都使用排斥和亲和色谱法纯化。使用一个质粒,允许GyrA作为融合蛋白的生产过剩与6个组氨酸残基在其carboxy-terminal域。GyrA -(他)6后纯化nickel-containing柱色谱法,和本地GyrB色谱后固定化新生霉素。重组DNA促旋酶(A2B2)已经成为超螺旋的活动。光亲和标记显示共价结合的3 h-photoaffinity模拟gyrase-DNA诺氟沙星的复杂,并主要GyrA。具体结合位点仍有待探索。